來自全球各地的五名科學家分享了蔡司激光共聚焦顯微鏡LSM880成像解決方案如何助力于他們的研究。
Tomohiko Taguchi博士
日本東北大學生命科學研究院細胞器病理生理學實驗室
“利用LSM 880 with Airyscan，顯著減少了樣品的光漂白現象。我們可以監測細胞內同一區域中存活時間超過3小時的內質網(ER)和溶酶體的動態變化，而無需對成像分辨率作出犧牲。
這一特點改進了我們的活細胞成像實驗設計：現在我們可以監測從頭至尾都呈現相對緩慢動力學的細胞反應，例如，在受到刺激后要經過若干小時才能達到峰值的細胞反應。這正是我們尋求的理想解決方案!”
EGFP標記的內質網(ER)蛋白(綠色)，mScarlet標記的溶酶體蛋白(紅色)
Ryan Schulze
美國梅奧診所生物化學與分子生物學助理教授
“我對細胞內脂滴和溶酶體之間的相互作用很感興趣。蔡司LSM 880 with Airyscan具有出色的分辨率和快速采集速度，便于監測這些微小結構之間的相互作用。”
Kohki Okabe博士
日本東京大學藥物科學研究生院生物分析化學實驗室
“Airyscan能夠揭示細胞器的內部結構，而無需對熒光染料的選擇或圖像采集的時間作出犧牲，而且也不必進行復雜的圖像處理。
利用常規熒光顯微鏡研究活細胞內細胞器的內部結構一直是個難題。這些用蔡司Airyscan拍攝的圖像顯示了COS7活細胞中細胞骨架(肌動蛋白絲)和線粒體的超分辨率熒光成像。”
Jason D. Vevea
美國威斯康星大學麥迪遜分校神經科學系Chapman實驗室
“目前有許多超高分辨率技術，但其中大部分都需要固定樣品、特殊的熒光標記，以及極慢圖像采集速度。我們一直在尋求一種能夠很好地進行活細胞成像的設備。這意味著顯微鏡可以快速獲取圖像，使用低光照劑量以防止對活細胞或熒光漂白，能使用傳統的熒光標記，并且系統易于使用。同時我們還想要一個足夠靈敏的系統來獲取低水平表達的遺傳編碼熒光團......
對我們來說，該系統更大的優勢之一是Fast Airyscan模式。我們竟能夠如此迅速地對活細胞成像，真是令人難以置信。這正是蔡司技術與眾不同之處。
表達遺傳編碼的谷氨酸傳感器的iGluSnFR神經元采用蔡司Fast Airyscan進行收集。使用Fast模式快速采集圖像，可以在更短的時間內分辨出樹突棘的細微細節，并獲得高質量的圖像。
我們需要對活體細胞進行快速三維成像，以及FRAP實驗。
盡管質膜的內源性熒光水平較低，但用Airyscan Fast進行的FRAP實驗還是成功的。這是經過測試的，因為這是我們所有FRAP應用中最困難的。
FRAP時間序列，大鼠海馬神經元質膜的熒光谷氨酸傳感器靶向。捕獲活細胞的超高分辨率延時圖像完全革新了“游戲規則”。最后，我們能夠非常輕易地成像HEK293細胞中的ER小管及其與線粒體外膜的相互作用。
用線粒體OMM轉染的HEK 293T細胞標記靶向msGFP，ER腔標記靶向mRuby3。該系統能夠清晰成像ER小管，這在這種細胞類型中通常具有挑戰性。在大多數細胞中，ER以細管網絡的形式存在，使得傳統的光學顯微鏡無法分辨單個小管，而只能觀察到ER層面。事實上，許多研究ER的人使用特定細胞系COS-7細胞，因為COS-7 ER網絡更多地擴散到細胞周圍，這使得研究人員可以對ER小管進行成像。最后，我們能夠清晰地成像HEK細胞中的ER小管。”
