組織切片制備技術(shù)發(fā)展至今已有上百年歷史，作為組織學(xué)及發(fā)育生物學(xué)研究最重要的基本制樣技術(shù)，在整個(gè)生命科學(xué)的發(fā)展中都扮演重要角色。今天，蔡司君就來帶大家一起了解一下雖然歷史悠久，但是至今都使用最多，應(yīng)用最廣的石蠟切片。
作為*早使用的包埋劑之一，石蠟?zāi)軌蜷L(zhǎng)久保存且對(duì)材料提供良好的支撐，有效的避免切片形變，同時(shí)，由于其質(zhì)地柔軟粘連，能夠以蠟帶的形式輕松制作連續(xù)切片，這是其它切片技術(shù)難以做到的。
石蠟切片的制備相對(duì)繁瑣，包括固定，脫水，包埋，切片，染色，封片，我們?cè)敿?xì)展開來看：
固定
活體組織一旦停止血液循環(huán)和物質(zhì)代謝就會(huì)慢慢腐敗自溶。因此，在切下組織塊后，需將其快速置于預(yù)先配制好的固定液中以保存其組織形態(tài)。FAA是常用的混合固定液，由70%酒精，冰醋酸，福爾馬林以90：5：5混合配制而成，收縮少，穿透快，24小時(shí)內(nèi)就能完成固定。
脫水
材料固定好后就需要脫水，脫水的目的是為了能將組織中的水置換為能與石蠟互溶的有機(jī)溶劑，這個(gè)過程需要溫和漸進(jìn)，一般采用先75%-乙醇梯度后再20%-二甲苯梯度脫水的方法以確保材料不發(fā)生強(qiáng)烈形變。
包埋
向已經(jīng)脫水透明好的樣品中少量多次加入碎蠟，使其在37℃下形成完全飽和的石蠟-二甲苯溶液，再將樣品置于60℃液態(tài)的50%-石蠟中以確保石蠟充分滲透樣品，隨后放入包埋盒中以不高于60℃的石蠟包埋。
切片
在開始切片前，需提前準(zhǔn)備好涂有蛋清甘油或多聚賴氨酸的黏附載玻片。將包埋好的蠟塊置于切片機(jī)上，以2-10μm的厚度切片。切成的蠟帶放在滴有水的玻片上，蠟帶會(huì)由水的表面張力而均勻展開，也可以使用水槽撈片來讓切片更加平整。吸去多余的水后，置于烘片機(jī)上37℃烘干。
染色封片
石蠟會(huì)妨礙染料進(jìn)入組織，需要用二甲苯浸泡將蠟脫掉，再-0%梯度乙醇復(fù)水。之后按照不同染料的染色方法，對(duì)切片進(jìn)行染色。
▲ HE染色，Masson三色法等復(fù)染色法都是病理學(xué)研究中的常用方法，利用不同結(jié)構(gòu)對(duì)染料親和性的不同對(duì)組織進(jìn)行差異化染色。而像天狼星紅這樣的染料則是能夠增強(qiáng)膠原纖維的雙折射性，可使其在偏光觀察下呈現(xiàn)不同的狀態(tài)。
染色完成后需再次進(jìn)行30%乙醇-二甲苯梯度脫水，最后使用中性樹膠封片，完全固化后就能觀察拍照了。當(dāng)然也可以使用商業(yè)化的封片劑，如果需要油鏡觀察則應(yīng)盡量選擇折射率在1.5左右的封片劑。
觀察與拍攝
當(dāng)我們完成切片的制備之后，應(yīng)該盡快完成觀察和成像，以防止放置時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致切片出現(xiàn)干裂，開膠等問題，影響我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
根據(jù)染料不同，我們可以選擇明場(chǎng)，偏光或者熒光的觀察方式進(jìn)行拍攝，蔡司為切片數(shù)字化提供不同解決方案，比如研究級(jí)的蔡司Axio Imager系列正置顯微鏡就是采集切片數(shù)據(jù)的上佳之選。
? 高分辨復(fù)消色差的物鏡配合無限遠(yuǎn)光學(xué)校正系統(tǒng)，力求更大限度校正像差;
? 蔡司特有鍍膜技術(shù)為熒光濾片和鏡頭組提供接近的透光率，能降低光損失，提供出色的圖像對(duì)比度。
當(dāng)然，如果我們需要對(duì)大量切片進(jìn)行數(shù)據(jù)采集時(shí)，一臺(tái)蔡司顯微鏡Axioscan 7全自動(dòng)玻片掃描系統(tǒng)(點(diǎn)擊查看)就能夠解放我們的雙手。
? 搭載明場(chǎng)，偏光，熒光三種成像模式，無論是何種染色方式的切片都能夠完美兼容;
? 整機(jī)全封閉機(jī)體更大程度確保了光路的穩(wěn)定性;
? 其100片的單次上樣容量，快速熒光濾片轉(zhuǎn)輪提供了快速高通量的掃描體驗(yàn);
? 全新設(shè)計(jì)的自動(dòng)校準(zhǔn)光路以及高端Peltier冷卻相機(jī)確保了Axioscan 7始終清晰銳利的圖像質(zhì)量和理想的色彩還原，是切片數(shù)字化的不二之選。
以上就是常規(guī)石蠟切片的制備方法，除常規(guī)化學(xué)染色外，該技術(shù)也常常用于制備免疫熒光切片，后續(xù)我們也會(huì)為您帶來詳細(xì)的介紹。
